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鸬鹚科

第一篇:鸬鹚科

维普资讯 20 07年 1 月 1   第 l 7卷 第 1 期  1 中 国 比较 医 学 杂 志  CHI ES   OURNAL OF C N EJ     OMP ARAT VE ME C NE I   DI I   N v mb r O 7 o e e ,2 O   Vo . 7 N 1 1  o. l I  研究 报告 ¥   ;   +申请认证

第一篇:鸬鹚科

2007年11月 中国比较医学杂志 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE November.2007 第17卷第¨期 MED盯[NE ¨.17‰.II #、∞∞∞g。、‰ g研究报告《 em.e目∞e;;、女 鹭科和鸬鹚科卵黄抗体的纯化 杨 帆,林树柱,刘先菊,全雄志,秦川,张连峰 (中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心,北京100021) 【摘要】目的纯化鹭科具有代表性的夜鹭及鸬鹚科具有代表性的鸬鹚的卵黄抗体I一。方法采用了水稀 释法和硫酸铵分级沉淀法粗提lgY,再过HiTrap I“Purification HP柱子进一步纯化。结果经两步纯化.得到了纯 化的鸬鹚和夜鹭的卵黄抗体l“,经SDS—PAGE检测为电泳纯,夜鹭和鸬鹚的卵黄抗体的相对分子质量约为180 x 1一。结论证实了鸬鹚和夜鹭的卵黄抗体I异Y的存在及其特性,为这两种鸟类的卵黄抗体IsY纯化,二级抗体制 备提供了参考。

【关键词】 鹭科;鸬鹋科;亲和层析;IgY 【文献标识码】^ 【文章编号】1671—7856{2007)11-0659.03 【中图分类号】R392 Purification of IgY from Egg Yolk of Heron--family and Cormorant--family YANG Fan,LIN Shu—zhu,LIU Xian—ju,QUAN Xiong-zIli QIN Chuan,ZHANG Lian-feng (1Mimto d 1.,nbomtor/AulnmJ Science.Cbinew Academy 0f Medieid Science& College,Bering 100021) Comparative Medicine Center.Peking Union Medical 【Abstract】Objective pmifi^d with water To Pu^9theIgYfrom egg yolk时night—heron and precipitation egg cormorant,Methods Egg yolk antibody The WaS diluted method。ammonium mdfate and/or affinity chromatography.Results pufifiwl x products we撑identified by SDS—PACE.The molecular weight 0f Conclusion produce The purification method for tgY from antibody and set up yolk smtihody of nigIlI_heron and cormorant"s 180 waB l o,. fo night-hewn and system coIrlllorant established anti this technique will be used anti—IgY the immune-monitoring for animals. chromatography 【Key wordsl Heron—family;Cormorant-fomily;I“;Mtlnity 鹭鸟属于湿地鸟类,常栖息于湿地附近的乔木 或灌丛中,在我国东北、河北、河南、山东、陕西、甘 肃、四川以及长江以南地区,国外越南、缅甸、印度等 国。足迹遍布亚洲、非洲、澳洲和北美洲。夜鹭属夏 候鸟,夏天到北方雏育,冬天又返回南方。

鸬鹚是一种分布极为广泛的水鸟,除了地球的 南极和北极,大部分国家都能目睹它们的身影。全 世界的鸬鹚共有32种,我国有5种,分别是(普通) 鸬鹚、斑头鸬鹚’海鸬鹚、红脸鸬鹚和黑颈鸬鹚,它们 当中又以普通鸬鹚最为常见,分布于我国大江南北 众多的湖泊、沼泽等水系中。鸬鹚是夏候鸟,每年3 月中下旬迁来我国的北方湿地,10月中上旬离开。

鹭科和鸬鹚科“。1的鸟类与人类接触密切的鸟 类。鹭科的夜鹭可能携带禽流感等病原。鸬鹚科的 鸬鹚可携带新城疫病毒等病原。本文就夜鹭和鸬鹚 卵黄lgY的纯化进行了研究,为进一步制备二级抗 体,建立免疫学检测技术储备资源,是建立多种和人 类接触的动物免疫监测体系的一部分。 【基金项目]社会公盏研究々硬(2005DtM J0qS)。

[作者简介】扬帆.女.硕士生,飙事领域:免疫学。E-mail:flj0085210126 c咖 [通讯作者]率"l。Enui]:qinchu柚@口岫edu   cn;张连嶂。E-mmh lianfengzhan93@yahoo帆cn 中国比较压学杂志2007年11月第J,卷第¨期Chin J c岬Med.Novemltt 2007,Ⅷ.17 No.1J 1材料和方法 1.1实验材料和仪器 鸬鹚蛋和夜鹭蛋各一枚,由内蒙古乌拉特前旗 乌梁素簿提供。HPLC蛋白纯化系统(Bio.Rad)。 HiTrap IgY Purification 释后.用40%饱和硫酸铵沉淀,12%SDS.PAGE检测 显示(图1,hne 3),经盐析后的抗体纯度较低,除 两条主要带外,还有其它含量较高的杂带。再用 HiTrap lgY pufificmion HP柱进一步纯化,相对分子 质量41 x 103至33×103之闯的主要杂蛋白被去除 HP(Pharmacia)。 (图1.Lane 4),纯化的夜鹭卵黄IsY在12%SDS. PAGE上显示两条相对分子质量66 103。 x 1.2夜鹭卵黄抗体的纯化 lgY的粗提:用双蒸水将卵黄液按1:9稀释“1, 搅拌15 rain,用0.I mol/L的HCI调节pH为5.1。

4℃放置12 h后,然后以10 25 000 103和24 x r/rain低温超逮离心 rain。在收集的上清液中加人Na2S04至终浓度为 mol/L,并调节pH为7.5。再取此lgY粗提液, mol/L PBS nH 7.4) O.6 加入等体积磷酸盐缓冲液(0.01 稀释,再加入饱和硫酸铵(pH 6.0—7.0),使硫酸铵 浓度为40%,4℃静置1 h.4℃,5 000 dmin离心20 rain,弃上清。再用PBS溶解沉淀至原I“的体积, 加入硫酸铵饱和溶液O.5体积,达33%饱和度,4'E. 5000 r/min离心20 rain,弃上清,取沉淀。用0、45 um 孔径的滤膜过滤。4℃条件下用0.01 rain离心10 rain,取上清液。 moll L PBS 硬鹭卵黄抗体先经饱和腰为40%硫酸铵粗提,有部分杂蛋白. 000 rpnY 后再过亲和层析住纯化。在12%SD譬PAGE上鉴定纯度。t 是蛋白质分子量标准;2是盐析沉淀产物;3是亲和纯化产 7、 物。 (pH 7.4)透析72 h,其间换液数次,4℃,2 igY的精细纯化:用嗜硫色谱法”1,先以pH 5,20 retool/L NaH2P04缓冲系统(含0、6 IgY purification mol/L 圈1提纯夜鹭卵黄IgY的SDS—PAGE分析 N如s04)平衡HiTrap HP柱。上样5 mL。以PH 7.5,20 mmol,L Nafl2PO,缓冲系统(含 0.6 mol/L N趣sq)洗柱,直到基线平稳。再以pH NaH:P04缓冲系统(不含Na。SO,)洗 yolkⅢpurifiedⅥlh 40%mtutali∞d then applied on}n”kY Pufificati∞HP. Lane I-硇咖dard肿J∞山盯wei小t ma^cr.Lar.e 2棚the products 0f ammonium¨lfate precipitation:Lnne 3~tim fraction The night?heron egg smnmnium sulfate-¨d 7.5,20 mmol/L coll忧tl,'tg from iⅡj“咿ch瑚nmq,礼. night-heron增Y ON F螗-l PAGE Detection the imtity of SDS. 脱蛋白,分管收集各洗脱峰。

1.3鸬鹚卵黄抗体的纯化 将鸬鹚蛋黄咀lo倍蒸馏水稀释.4℃,12 000“ 2.2鸬鹚卵黄抗体的纯化结果 按方法1.3所述,鸬鹚卵黄经硫酸铵初步分级 沉淀,四等份的样品加饱和硫酸铵分别至饱和度为 30%。40%,50%,60%,12%SDS.PAGE(图2)显示其 产物均有杂蛋白的存在,随着盐浓度的增加,沉淀下 来的蛋白也随之增加,其中40%饱和度时目的蛋白 所占比例最高(图2,line 4)。后经第二次分级沉 淀,将前一步的沉淀溶解后,加饱和硫酸铵分别至饱 和度20%,30%,40%,50%。其中,二次沉淀达 30%饱和度时,目的蛋白完全沉淀出来,并且达到了 电泳纯(图3,line 2)。

3讨论 鹭鸟和鸬鹚等这些鸟类可通过分泌物、排泄物、 羽毛污染环境,成为传染疾病的传染源。自然界带 rain离心,取上清。取上清液5 mL/份(四份),等量 的PBS(O.01 mol/L pH 7.4)稀释后为10 mL。加pH 7.0的饱和硫酸铵分别至终浓度为30%,40%, 50%,60%。40c静止4 h,以5 000 r/rain离心25 rain,取上清,取沉淀,沉淀溶于原来体积分数的PBS 中。再加饱和硫酸铵分别至20%,30%,40%,50% 等不同饱和度。4。C静置过夜,次日4。C,5 4℃透析于PBS中24 h,更换4次透析液。 2结果 000 r/rain 离心20min。弃上清,沉淀稀释于5 mL的PBS中。 2.1夜鹭卵黄抗体的纯化结果 接方法1.2所述,取夜鹭卵的卵黄,用双蒸水稀   中国比较医学杂志2007年11月第17卷第ll期Chin J Corap Med,Novemher 2007.Voll7.Noll 661 鸬鹅蛋黄分别用30%.40%.50%,帅%饱和度悦酸镀丹级沉 淀.在SDS-PAGE上鉴定敢景。1是蛋白Marker:2是30%饱 和廑沉淀产物:,是40%地和度沉淀产物;4是50%饱和度沉 淀产物;5是60%饱和度沉淀产物。

鸬鹅样品经硫酸铵第一敬分级沉淀后来击障所有杂质.再经 30%饱的二次祝淀,得到kY纯品。l是蛋白质分子量标准;2 是纯化产物 图2鸬鹚IgY的硫酸铵沉淀 The ewnnorant egg 凰3两步硫酸搜纯化鸬鹚卵黄IgY的电泳分析 The and m_m precipitmed“m 30%?40%,50%. cmTI”TMl then IgY purified from 40%satmation 0f㈣ium_IIf“ 60%attaratlon d aⅢⅢ∞耐唧眦lfate Lane deteoed∞SDS-PAGE 1 The硼面c8tio日efl广;eierg'y忡 m itandard nlOheutar wei曲l 30%saturation 40%saturation of 0r ammoraum ammonium precipitated柄th h口m 30%fmm SDS-PAGE(12%gels) atudysi^ofI"purified IsY Lane c。ⅢⅢegg marker;Lane yolk mTk目:Lane sulfat*;Lane htl∞from 3~the fraeti∞of 2 wH 1一Standard h MW 2Ⅷthe cormorant蝌 b two steps ?u[fate;L∞e Lane 4¨BfractionⅡ50%mtunttiⅫ0fⅢ“umlulfate; The precipitation of cormorant egg Purified Fi8.3 m“ep§ammonium Analysij of the sulfate pcecipitation. cormorant IgY purified 5惴frac c油of∞弼. yolk“th ammonium sulfate precipitation Fig.2 ammonium sulfate 物学杂志.1998,(4):34—38 张龙胜.刘作模.张啤四种t类繁殖生态生物学研究[J].生 态学报,1994,14(i):∞一83. 3 RieIdof3 RE.Patterns of日nnhin 451. 4 菌的野生水鸟对与之有接触的家鸭和人群也构成危 险,而城乡的众多鸟类,作为传染源乃是有广泛地区 性和普遍威胁性!本次实验制备了高纯度的夜鹭和 birdsf J]Ibis,19∞,110:419— 鸬鹚的卵黄抗体埘。为今后的相关研究提供了参 考。 Akim EM.Nakai S.Compafi删of from four purificatlon laid mtShc<h for the pruducti∞of immtmgld:dlm eggs h hem imaumlzed mlh 由于J疗具有生物学和制备简便等优势,近年 来在诊断试剂制备、疾病防治方面已有广泛的应 用“。3。当然IgY作为高蛋白物质也存在不可避免 的缺陷,如易污染、注射困难、吸收慢等,这些有待在 应用中进一步改善。随着提纯方法的深入研究和效 6 ¨entromxigemc E.Coil 160:207 2㈣n(J].J Imm,,nol Methods.1993. 5 kimHO.OuranceTD.Li—Chart Ec.Reusability 0,a*/dln i~o#oladin egg biotlnyhtod Y∞luuma in immumattinity c}Ⅱ伽_”鲷1phy[J]. Anal bi优hem.1999,268(2):383. C舳zm“G.Tini m,imt the M.ChilcaD,etd.C,eneml appicability 0f chick卸 率不断提高,在医学方面越来越显示出不可估量的 应用前景。

本研究工作成功建立了的纯化鸬鹚和夜鹭卵黄 抗体的方法,为进一步建立鸟类的监测体系打下丁 基础。 参考文献: 【I]周立志.束愉钧,马勇紫莲山三种鹭繁殖生物学研究[J]动 7 yolk antibodies:the Ded佃Ⅱ%of igY factor immunogldmlin?raised hypoxi-?indaeibh hlph.[J]FASEB J.1999.13 (1):81. Pieh TH,Yates levels iu VJ,Cll4唱PW.Use clfickepH of egg yolk to determine antibody i眦ulated with●hemsggluti吐ting duck ^曲lo恤(幽口“衄127一//ke)[J】^"蚰肼s,1985,29(2):457 —464 [修回日期32007.9.13   +申请认证

第一篇:鸬鹚科

鸬鹚 鸬鹚:1. 亦作“鸬鹚” 2. 水鸟名。俗叫鱼鹰﹑水老鸦。羽毛黑色,有绿色光泽, 。

颔下有小喉囊,嘴长,上嘴尖端有钩,善潜水捕食鱼类。渔人常驯养之以捕鱼。鸬鹚是鸟类 中优秀的潜水明星。3. 鸬鹚陂的省称。4. 鸬鹚杓的省称。

鹈形目(Pelecaniformes)鸕鶿科(Phalacrocoracidae)26? 30 种水禽,有黑色金属光 泽,能在水下潜游。这种鸟在东方和其他各地已为人驯化用以捕鱼。以对人类价值不大的鱼 为食。所有种类均生产鸟粪。除寒冷乾旱的内陆和中太平洋岛屿外,鸕鶿栖息于所有海滨、 湖泊和河流。鸕鶿用海藻和鸟粪在悬崖上筑巢,或在树木或灌丛上用树枝筑巢。这种鸟每窝 产 2? 4 枚白垩色卵(刚产下时呈淡蓝色)。鸕鶿孵化期为 3? 5 周。第三年内性成熟。鸕鶿喙 长, 尖端钩状。

脸上有数块裸露的皮肤。

有一个小喉囊。

在这种鸟中, 普通鸕鶿 (Phalacrocorax carbo)是最大的分布最广的种;白颊,体长 100 公分(40 吋);繁殖於加拿大东部到冰岛, 跨越欧亚大陆到澳大利亚和纽西兰, 及部分非洲。

普通鸕鶿和稍小的绿鸕鶿 (P. capillatus) 可驯化用以捕鱼。秘鲁鸕鶿(P. bougainvillii, 即南美鸕鶿)和非洲南部海滨的好望角鸕 鶿(P. capensis)则为最重要的鸟粪生产者。

鸬鹚也叫水老鸦、鱼鹰。鸟类。身体比鸭狭长,体羽为金属黑色,善潜水捕鱼,飞行时 直线前进。中国南方多饲养来帮助捕鱼。是鹈形目鸬鹚科的 1 属,有 3作文0 种。除南北极外, 几乎遍布全球。该鸟可驯养捕鱼,我国古代就已驯养利、用,为常见的笼养和散养鸟类。野 生鸬鹚分布于全国各地,繁殖于东北、内蒙古、青海湖及新疆西部等地。

形态:该鸟体羽黑色,并带紫色金属光泽。肩羽和大覆羽暗棕色,羽边黑色,而呈鳞片 状,体长最大可达 100 厘米。嘴强而长,锥状,先端具锐钩,适于啄鱼;下喉有小囊;喉部具 大 白点。生殖期中,胁下有大形白斑,头及颈密生白丝状羽。后头部有一不很明显的羽冠。

幼鸟的下体黑色,杂以白羽。眼绿色,嘴端褐色,下嘴基部灰白色,而裸区及喉暗红色,脚 黑色。脚后位,趾扁,后趾较长,具全蹼。

生态

鸬鹚善于潜水, 能在水中以长而钩的嘴捕鱼。

野生鸬鹚平时栖息于河川和湖沼中, 也常低飞,掠过水面。飞时颈和脚均伸直。夏季在近水的岩崖或高树上,或沼泽低地的矮树 上营巢。性不甚畏人。常在海边、湖滨、淡水中间活动。栖止时,在石头或树桩上久立不动。

飞行力很强。除迁徙时期外,一般不离开水域。主要食鱼类和甲壳类动物为食。鸬鹚在捕猎 的时候,脑袋扎在水里追踪猎物。鸬鹚的翅膀已经进化到可以帮助划水。因此,鸬鹚在海草 丛生的水域主要用脚蹼游水,在清澈的水域或是沙底的的水域,鸬鹚就脚蹼和翅膀并用。在 能见度低的水里, 鸬鹚往往采用偷偷靠近猎物的方式到达猎物身边时, 突然伸长脖子用嘴发 出致命一击。

这样, 无论多么灵活的猎物也绝难逃脱。

在昏暗的水下, 鸬鹚一般看不清猎物。

因此,它只有借助敏锐的听觉才能百发百中。

鸬鹚捕到猎物后一定要浮出水面吞咽。所以, 在我国南方和印度的江河湖海中能见到渔民们驯养的鸬鹚在帮助渔民们捕鱼。

渔民们放出鸬 鹚之前,先在鸬鹚的脖子上套上一个皮圈,这样,就可以防止鸬鹚将捕获的猎物吞下肚子。

鸬鹚捕到鱼后跳到渔民的船上,在渔民的帮助下将嘴里的鱼吐出来。鸬鹚很贪食,一昼夜它 要吃掉 3 斤重的鱼。一条 35 公分长,半斤重的鱼它能一口吞下。

种类:中国有 5 种:鸬鹚(又称普通鸬鹚)、斑头鸬鹚、海鸬鹚、红脸鸬鹚和黑颈鸬鹚。

东南沿海各省常见。

鸬鹚广泛分布与亚欧大陆及非洲大陆的江河湖海中。

人们常见的是江河 中的普通鸬鹚。其实,鸬鹚的种类也很丰富。它们虽然都属于鸬鹚,但是相貌和习性各有特 色。

生活在加拉帕哥斯群岛上的加拉帕哥斯鸬鹚和广泛分布在亚洲和非洲的大鸬鹚都是十分 有特色的品种。

繁殖

该鸟在人工驯养条件下能正常产卵, 每年初夏进入繁殖期, 每只雌鸟可产卵 6-20 枚,其繁殖生态与家鹅相似。每当繁殖季节,到临近水域的悬崖峭壁上、大树上或沼泽地的 矮树上、芦苇中以树枝或海藻营巢。每窝卵 2~5 枚。卵白色而具蓝或浅绿光泽。孵化期 28 天。雏鸟为晚成性。亲鸟把捕捉到的鱼贮在喉囊中,雏鸟将头伸入啄食。在一些地方人们驯 化它们用以捕鱼。渔民称之为鱼鹰,其实,叫鱼鹰的还有完全不同的另一种鸟——鹗。 药用价值 【拼音名】 Lú Cí 【别名】鸬鹚、鸬饲、水老鸦、鱼鸦、鱼鹰、鮱鸦 【来源】鹈形目鸬鹚科鸬鹚(鸬鹚)Phalacrocorax carbo(L.) ,以肉入药。

【生境分布】南方地区河流中。

【功能主治】利尿。主治水肿。

【备注】鸬鹚,嗜吃鱼类,常被驯养,驱使捕鱼。

【摘录】 《全国中草药汇编》
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